偏光显微镜结构原理
偏光显微镜结构使用及注意事项
目录
偏光显微镜的结构
偏光显微镜的分类
偏光显微镜原理及应用
偏光显微镜装置要求
偏光显微镜使用注意事项
1、目镜，2、镜筒，3、勃氏镜，4、粗动手轮，5、微调手轮 6、镜臂，7、镜座，8、上偏光镜，9、试板孔，10、物镜 11、载物台，12、聚光镜，13、锁光圈，14、下偏光镜，15、反光镜
偏光显微镜的分类
1、双目型偏光显微镜
2、电脑型偏光显微镜
3、数码型偏光显微镜
4、透反射偏光显微镜
偏光显微镜的应用
1. 在生物体中，不同的纤维蛋白，如胶原蛋白、弹力纤维、张力纤维、肌肉纤维等结构显示出明显的各项异性。可以在测定之前，使用偏光显微镜得到这些纤维中分子排列的详细情况。
2. 应用偏光显微镜可以观察具有晶体构造的生物学材料，如淀粉粒。
3. 研究动物和植物的活体细胞，如植物细胞中的纺锤丝。
偏光显微镜的装置要求
a.光源：可以采用单色光，一般镜检可使用电光源。
b.目镜：要带有十字线的目镜。
c.聚光镜：为了取得平行偏光，应使用能推出上透镜的摇出式聚光镜。
d.伯特兰透镜：聚光镜光路中的辅助部件，这是把物体所有造成的初级相放大为次级相的辅助透镜，它可保证用目镜来观察在物镜后焦平面中形成的平涉图样。
偏光显微镜的使用注意事项
1.不要松动所有固定螺丝（物台制动螺丝除外）。
2.下偏光镜易脱落，不要经常旋转。
3.放置薄片前先稍微下降载物台，盖玻片朝上，不要碰到物镜。移动薄片时不要给载物台施加压力。
4.不要将薄片放在其他物品上，以免拖动摔坏。显微镜使用、保养注意事项
5.更换物镜时，旋转物镜转盘，不要扳动物镜。
6.使用上偏光镜、试板、勃氏镜时要轻拿轻放。
7.长时间停用显微镜，要关闭镜座上的电源开关，或将亮度调到最小。
光学显微分析方法
光学显微分析是利用可见光观察物体的表面型貌和内部结构，鉴定晶体的光学性质。透明晶体的观察可利用透射显微镜，如偏光显微镜。而对于不透明物体来说就只能使用反射式显微镜，即金相显微镜。利用偏光显微镜和金相显微镜进行晶体光学鉴定，是研究材料的良好方法之一。
2.3.1 偏光显微镜
偏光显微镜是目前研究材料晶体显微结构的有效工具。随着科学技术的发展，偏光显微镜技术在不断地改进中，镜下的鉴定工作逐步由定性分析发展到定量鉴定，为显微镜在各个科学领域中的应用开辟了良好的前景。
23.1.1. 偏光显微镜的构成
偏光显微镜的类型较多，但它们的构造基本相似。下面以XPT—7型偏光显微镜（图2.13）为例介绍其基本构成：
镜臂：呈弓形，其下端与镜座相联，上部装有镜筒。
1、目镜，2、镜筒，3、勃氏镜，4、粗动手轮，5、微调手轮，6、镜臂，7、镜座，8、上偏光镜，9、试板孔，10、物镜，11、载物台，12、聚光镜，13、锁光圈，14、下偏光镜，15、反光镜
反光镜：是一个拥有平、凹两面的小圆镜，用于把光反射到显微镜的光学系统中去。当进行低倍研究时，需要的光量不大，可用平面镜，当进行高倍研究时，使用凹镜使光少许聚敛，可以增加视域的亮度。
下偏光镜：位于反光镜之上、从反光镜反射来的自然光，通过下偏光镜后，即成为振动方向固定的偏光，通常用PP代表下偏光镜的振动方向。下偏光镜可以转动，以便调节其振动方向。
锁光圈：在下偏光镜之上。可以自由开合，用以控制进入视野的光亮。
聚光镜：在锁光圈之上。它是一个小凸透镜，可以把下偏光镜透出的偏光聚敛而成锥形偏光。聚光镜可以自由安上或放下。
载物台：是一个可以转动的圆形平台。边缘有刻度（0-360）°，附有游标尺，读出的角度可精确至1/10度。同时配有固定螺丝，用以固定载物台。载物台中央有圆孔，是光线的通道。载物台上有一对弹簧夹，用以夹持光片。
镜筒：为长的圆筒形，安装在镜臂上。转动镜臂上的粗动螺丝或微动螺丝可用以调节焦距。镜筒上端装有目镜，下端装有物镜，中间有试板孔、上偏光镜和勃氏镜。
物镜：由l-5组复式透镜组成的。其下端的透镜称前透镜，上端的透镜称后透镜。前透镜愈小，镜头愈长，其放大倍数愈大。每台显微镜附有3-7个不同放大倍数的物镜。每个物镜上刻有放大倍数、数值孔径（N.A）、机械筒长、盖玻片厚度等。数值孔径标明物镜的聚光能力，放大倍数越高的物镜其数值孔径越大，而对于同一放大倍数的物镜，数值孔径越大则分辨率越高。
目镜：由两片平凸透镜组成，目镜筒中可放置十字目镜、目镜方格网或分化目镜等。显微镜的总放大倍数为目镜放大倍数与物镜放大倍数的乘积。
上偏光镜：其构造及作用与下偏光镜相同，但其振动方向（以AA表示）与下偏光镜振动方向（以PP表示）垂直。上偏光镜可以自由推入或拉出。
勃氏镜：位于目镜与上偏光镜之间，是一个小的凸透镜，根据需要可推入或拉出。此外，除了以上一些主要部件外，偏光显微镜还有一些其他附件，如用于定量分析的载物台测微尺、机械载物台和电动求积仪，用于晶体光性鉴定的石膏试板、云母试板、石英楔补色器等。
利用偏光显微镜的上述部件可以组合成单偏光、正交偏光、锥光等光学分析系统，用来鉴定晶体的光学性质。
偏光显微镜下的晶体光学性质
利用单偏光镜鉴定晶体光学性质时，仅使用偏光显微镜中的下偏光镜，而不使用锥光镜、上偏光镜和勃氏镜等光学部件，利用下偏光镜观察、测定晶体光学性质。单偏光下观察的内容有：晶体形态、晶体颗粒大小、百分含量、解理、突起，糙面、贝克线以及颜色和多色性等。
（1） 晶体的形态
每一种晶体往往具有一定的结晶习性，构成一定的形态。晶体的形状、大小、完整程度常与形成条件、析晶顺序等有密切关系。所以研究晶体的形态，不仅可以帮助我们鉴定晶体，还可以用来推测其形成条件。需要注意的是，在偏光显微镜中见到的晶体形态并不是整个立体形态，仅仅是晶体的某一切片。切片方向不同，晶体的形态也不相同。
在单偏光中还可见晶体的自形程度，即晶体边棱的规则程度。根据其不同的形貌特征可将晶体划分下列几个类型：
自形晶：光片中晶形完整，一般呈规则的多边形（图2.14a），边棱全为直线。析晶早、结晶能力强、物理化学环境适宜于晶体生长时，便形成自形晶。
半自形晶：光片中晶形较完整，但比自形晶差，（图2.14b），部分晶棱为直线，部分为不规则的曲线。半自形晶往往是析晶较晚的晶体。
它形晶：光片中晶形呈不规则的粒状，晶棱均为它形的曲线（图2.14c）。它形晶是析晶最晚或温度下降较快时析出的晶体。
由于析晶时物质成分的粘度和杂质等因素的影响，还会形成一些奇形的晶体。这些晶体在光片中呈雪花状、树枝状、鳞片状和放射状等形态的骸晶。这在玻璃结石中较为常见。
此外，在镜下常能见到一个大晶体包裹着一些小晶体或其他物质，称之为包裹体。包裹体可以是气体、液体、其他晶体或同种晶体。从包裹体的成分和形态可以分析出晶体生长时的物理化学环境，成为物相分析的一个依据。
（2） 晶体的解理及解理角
晶体沿着一定方向裂开成光滑平面的性质称为解理。裂开的面称为解理面。解理面一般平行于晶面。许多晶体都具有解理，但解理的方向、组数（沿几个方向有解理）及完善程度不一样，所以解理是鉴定晶体的一个依据。解理具有方向性，它与晶面或晶轴有一定关系。
晶体的解理在光片中是一些平行或交叉的细缝（解理面与切面的交线），称为解理缝。根据解理发育的完善程度，可以划分为极完全解理（2.15a）、完全解理（2.15b）和不完全解理（2.15c）三类。有些晶体具有两组以上解理，可以通过测定解理角来鉴定晶体。
（3） 颜色和多色性
光片中晶体的颜色，是晶体对白光中七色光波选择吸收的结果。
如果晶体对白光中七色光波同等程度的吸收，透过晶体后仍为白光，只是强度有所减弱，此时晶体不具颜色，为无色晶体。如果晶体对白光中的各色光吸收程度不同，则透出晶体的各种色光强度比例将发生改变，晶体呈现特定的颜色。光片中晶体颜色的深浅，称为颜色的浓度。颜色浓度除与该晶体的吸收能力有关外，还与光片的一种感觉，因为在同一光片中，各个晶体表面实际上是在同—水平面上，这种视觉上的突起主要是由于晶体折射率与周围树胶折射率不同而引起的。晶体折射率与树胶折射率相差愈大，则晶体的突起愈高。在晶体光片制备时使用的树胶折射率等于1.54，对折射率大于树胶的晶体属正突起；折射率小于树胶的晶体属负突起，在晶体光学鉴定时可利用贝克线区分晶体的正负突起。根据光片中突起的高低、轮廓、糙面的明显程度，一般把警惕的突起划分为六个等级，如表2.1所示。非均质体晶体的折射率随光波在晶体中的振动方向不同而有差异。双折射率很大的晶体，在单偏光镜下，旋转物台，突起高低发生明显的变化，这种现象称为闪突起。例如方解石晶体有明显的闪突起，可以作为鉴定晶体的一个有效特征。
正交偏光镜下的晶体光学性
所谓正交偏光镜，就是下偏光镜和上偏光镜联合使用，并且两偏光镜的振动面处于互相垂直位置（图2.17）。为了观察方便，要使两偏光镜的振动方向严格与目镜“东西”、“南北”十字丝一致。在正交偏光镜下观察时，入射光是近于平行的光束，故又称为平行正交偏光镜。在正交偏光镜的物台上，如不放任何晶体光片时（图2.17），其视域是黑暗的。因为光通过下偏光镜，其振动方向被限制在下偏光镜的振动面PP内，当PP方向振动的光到达上偏光镜AA时，由于两振动方向互相垂直，光无法通过上偏光镜，所以视域是黑暗的。
若在正交偏光镜下的物台上放置晶体光片，由于晶体的性质和切片方向不同，将出现消光和干涉等光学现象。
（1） 消光现象
晶体在正交镜下呈现黑暗的现象，称为消光现象。消光现象包括全消光和四次消光两种。
在正交镜下放均质体任意方向切片和非均质体垂直光轴的切片（图2.18a），由于这两种切片的光率体切面皆为圆切面，光波垂直这种切片入射时，不发生双折射，也不改变入射光的振动方向。
所以自下偏光镜透出的振动方向平行PP的偏光，通过晶体后，不改变原来的振动方向并与上偏光镜的振动方向AA垂直，故不能透出上偏光镜，使视域黑暗。旋转物台360°，消光现象不改变。这种消光现象称为全消光。非晶体、等轴晶系的晶体和非均质晶体垂直光轴的切片均为全消光。
在正交镜下放上非均质体其它方向的切片，由于这种切片的光率体切面为椭圆，当椭圆切面的长、短半径与上、下偏光镜的振动方向（PP、AA）一致时（图2.18b），从下偏光镜透出的振动方向平行PP的偏光，可以透过晶体而不改变原来的振动方向。当它到达上偏光镜时，因PP与AA垂直，透不过上偏光镜而使晶体消光。而在其他位置时则总有部分光透过上偏光镜。旋转物台360°，晶体切片上的光率体椭圆半径与上、下偏光镜的振动方向有四次平行的机会（即消光位），故晶体出现四次消光现象。
由此可知，在正交镜下呈现全消光的晶体，可能是均质体，也可能是非均质体垂直光轴的切片。而呈现四次消光的，一定是非均质体晶体。所以四次消光是非均质体的特征。
（2） 干涉现象 非均质体垂直光轴以外的任意方向切片，不在消光位时，则将发生干涉作用。
当非均质体任意方向切片上的光率体椭圆半径K1、K2与上、下偏光镜的振动方向AA、PP斜交时（图2.19），自然光透过下偏光镜以振动方向平行PP的偏光进入晶体切片后，发生双折射，分解形成振动方向平行K1、K2的两种偏光。K1、K2的折射率不等（NK1>NK2），在切片中的传播速度也不相同（K1为慢光，K2为快光），因此它们透出晶体切片的时间必有先后，于是就产生了光程差，以R表示。如式2.4所示。当 K1、K2透过切片在空气中传播时，由于传播速度相同，所以它们在到达上偏光镜之前，光程差保持不变。R=d（Ng-Np）
式中：R为光程差，d为晶体厚度，Ng、Np为晶体光率体切面的主折射率。光程差通常以nm为单位表示。光程差的大小取决于晶体的双折射率和晶体的厚度。
K1、K2两条偏光的振动方向与上偏光镜的振动方向（AA）斜交，故当K1、K2先后进入上偏光镜时再度分解，形成K1’、K1”和K2’、K2”四条偏光。其中K1”和K2”的振动方向垂直于上偏光镜的振动方向AA，不能透过上偏光镜；而K1’和K2’的振动方向平行于上偏光镜的振动方向AA，因此全部透过。由于K1’和K2’均起源于射入晶体之前的那束偏振光，两者振动频率相同，均在AA平面内振动，且存在光程差，故将会导致光的干涉效应。K1、K2两束光相叠加后的合成光波振幅为：式中，OB值为入射光的强度；α是晶体切片上光率体椭圆半径与偏光镜振动方向间的夹角，转动物台可以改变α角；λ是所用单色光的波长。当晶体切片内的光波振动方向与上、下偏光镜的振动方向平行时，α=0，A+ =0，晶体切片处于消光位。旋转物台一周，当α=0、90、180、270°时，均出现四次消光现象。而当α=45、135、225和315°时，晶体的亮度最大。如果使用单色光作光源，当光程差为波长的整数倍时，sin[d(Ng-Np)π/λ]=sinnπ＝0，A+ =0，此时晶体切片呈黑色。而当光程差为半波长的奇数倍时，sin[(2n+1) π/2]=1，使合成波振幅A+ 最大，干涉结果使光增强。如果沿石英光轴方向，由薄至厚磨成一条楔形的光片（称为石英楔）。
偏光显微镜使用及维护
1.开启偏光显微镜电源后，若暂时不使用，可以将显微镜灯光调至最暗，每次关闭偏光显微镜电源前，将显微镜灯光调至最暗，等灯箱完全冷却后（约15分钟后），将电源线卷好，而无需频繁开关偏光显微镜电源。
2.术中在无菌条件下进行调整操作。
3.妥善保管好电源线及脚控开关以免损坏有关器件，使用完及时归位。
4.注意保持光学镜头的清洁，手指不得接触光学的表面，每如镜头表面有灰尘可用干净的毛笔或笔刷弹去。如有油污，用脱脂棉沾少量乙醚乙醇混合液（乙醇30%、乙醚70%）擦拭，擦时不要让混合液渗入透镜内部，以免镜头脱胶。
5.仪器使用时光导纤维不易受过大的弯曲力，需要弯曲时，弯曲弧度不过小，以免折断。
6.本仪器有两组光源灯1和灯2，使用时可随时切换，灯泡切换转盘必需切换到位，否则将影响照明度。换灯泡须在停机30分钟后进行，以免高温烫伤。
7.使用和移动仪器时，手握机架的手柄，缓慢推行，勿将承载臂、弹簧臂和机头同时置于仪器面板的背侧方向以防倾倒造成危险。
8.使用与保管仪器的地方应保持清洁，注意防尘、防潮、防酸碱等有腐蚀易发物质的侵蚀。仪器使用完或长期不用时，应盖上防尘罩。
9.及时记录使用情况、性能、故障及解决办法，定期维修保养。本仪器保修期一年，如发生故障及时与本公司联系检查维修。
荧光显微镜结构使用注意事项
荧光显微镜需要在暗室内进行观院否则因有其他光线而影响观察的正确性。荧光的产生是由于某些物质被辐射线波长较短的光线照射后即发出波长较长的可见光，有的物质或细胞本身并不产生荧光，但在有机荧光色素浸润下即能产生荧光。观察方法可分为两种：
1)暗视场照明法 将紧外光照明器前面的全部滤光片用人这时汞气灯所发射的全邢可见光被滤去，而i至过的紫外光，其波长约为3000人一300 o人此乃正常的荧光观察法。
(2)深蓝视场照明法 柑纤近紫外光照明器光源的两组滤光片用人这时把汞气灯发生的光波限制在一定的波氏内(3000A一4500A)，视场内有深蓝色的背景出现，是为求得足够强度的紫外光照明标本。示为了使照明标本的紫外光线不进入观察者的眼睛，以免损坏眼睛和影响荧光观察的正确性起见在物镜与目镜之间安装有两组滤光器并可配合组成各种颜色，使用时极为方便。
在使用荧光显微镜应把定距尺安装在紫外光照明器与显微镜之间，以保持照明器的正确位置。
该显微镜也可安装白识灯照明器，灯泡为6v/15W之白炽灯，其插头应与变压器—L白炽灯头插座相连接。
作荧光观察时，标本所用的载物台最好采用石英载物器，
当无石英载物片时，亦可采用普通玻璃载物台，因普通玻璃对较长波段之紫外光吸收高压汞气灯一经熄灭，要等到汞气灯冷却后才可重新发光，因而在进行连续观察分析不应中途灭灯，以免浪费时间。紫外光照明器必须通过变压器才能使用荧光显微镜：荧光显微镜是以紫外线为光源，用以照射被检物体，使之发出荧光，然后在显微镜下观察物体的形状及其所在位置。荧光显微镜用于研究细胞内物质的吸收、运输、化学物质的分布及定位等。 细胞中有些物质，如叶绿素等，受紫外线照射后可发荧光；另有一些物质本身虽不能发荧光，但如果用荧光染料或荧光抗体染色后，经紫外线照射亦可发荧光，荧光显微镜就是对这类物质进行定性和定量研究的工具之一。荧光显微镜和普通显微镜有以下的区别：
1.照明方式通常为落射式，即光源通过物镜投射于样品上；
2.光源为紫外光，波长较短分辨率高于普通显微镜；
3.有两个特殊的滤光片，
光源前的用以滤除可见光，目镜和物镜之间的用于滤除紫外线，用以保护人眼。
荧光显微镜也是光学显微镜的一种，主要的区别是二者的激发波长不同。由此决定了荧光显微镜与普通光学显微镜结构和使用方法上的不同。
荧光显微镜是免疫荧光显微镜的基本工具。它是由光源、滤板系统和光学系统等主要部件组成。是利用一定波长的光激发标本发射荧光，通过物镜和目镜系统放大以观察标本的荧光图像。
工作原理光源
现在多采用200W的高压汞灯作光源，它是用石英玻璃制作，中间呈球形，内充一定数量的汞，工作时由两个电极间放电，引起水银蒸发，球内气压迅速升高，当水银完全蒸发时，可达50～70个标准大气压力，这一过程一般约需5～15min。超高压汞灯的发光是电极间放电使水银分子不断解离和还原过程中发射光量子的结果。它发射很强的紫外和蓝紫光，足以激发各类荧光物质，因此，为荧光显微镜普遍采用。
超高压汞灯也散发大量热能。因此，灯室必须有良好的散热条件，工作环境温度不宜太高。高压汞灯在使用初期不需高电压即可引燃，使用一些时间后，则需要高压启动（约为15000V），启动后，维持工作电压一般为50～60V，工作电流约4A左右。200W超高压汞灯的平均寿命，在每次使用2h的情况下约为200h，开动一次工作时间愈短，则寿命愈短，如开一次只工作20min，则寿命降低50%。因此，使用时尽量减少启动次数。灯泡在使用过程中，其光效是逐渐降低的。灯熄灭后要等待冷却才能重新启动。点燃灯泡后不可立即
关闭，以免水银蒸发不完全而损坏电极，一般需要等15min。由于超高压汞灯压力很高，紫外线强烈，因此灯泡必须置灯室中方可点燃，以免伤害眼睛和发生爆炸时造成操作。
高压汞灯（100W或200W）光源的电路和包括变压、镇流、启动几个部分。在灯室上有调节灯泡发光中心的系统，灯泡球部后面安装有镀铝的凹面反射镜，前面安装有集光透镜。
国产高压汞灯GCQ-200型性能良好，可以代替HBO-200等型的进口灯泡，平均寿命在200h以上，价格也比较低。
一种简易轻便型高色温溴钨荧光光源装置，体积小，重量轻，功率小，交、直流两用（自带直流电源），易于携带，使用方便，已推广应用。
滤色系统
滤色系统是荧光显微镜的一个部分，由激发滤板和压制滤板组成。滤板型号，名称各不统一。滤板一般都以基本色调命名，前面字母代表色调，后面字母代表玻璃，数字代表型号特点。如产品BG，就是种蓝色玻璃，B是蓝色的第一个字母，G是玻璃的第一个字母；产品的名称已统一用拼音字母表示，如相当于BG12的蓝色滤板名为QB24，Q是青色（蓝色）拼音的第一个字母，B是玻璃拼音的第一个字母。不过有的滤板也可以透光分界滤长命名，如K530，就是表示压制滤长530nm以下的光而透过530nm以上的光。有的滤板完全以数字命名。
1．激发滤板 根据光源和荧光色素的特点，可选用以下三类激发滤板，提供一定波长范围的激发光。
紫外光激发滤板：此滤板可使400nm以下的紫外光透过，阻挡400nm以上的可见光通过。常用型号为UG-1或UG-5，外加一块BG-38，以除去红色尾波。
紫外蓝光激发滤板：此滤板可使300～450nm范围内的光通过。常用型号为ZB-2或ZB-3，外加BG-38。
紫蓝光激发滤板：它可使350～490nm的光通过。常用型号为QB24（BG12）。
最大吸收峰在500nm以上者的荧光素（如罗达明色素）可用蓝绿滤板（如B-7）激发。
近年开始采用金属模干涉滤板，由于针对性强，波长适当，因而激发效果比较玻璃滤更好。如FITC专用KP490滤板均比玻璃滤板效果良好。
激发滤板分薄厚两种，一般视野选用薄滤板，亮视野荧光显微镜可选用厚一些。基本要求是以获得明亮的荧光和良好的背景。
2．压制滤板 压制滤板的作用是完全阻挡激发光通过，提供相应波长范围的荧光。与激发滤板相对应，常用以下3种压制滤板：
紫外光压制滤板：可通过可见光、阻挡紫外光通过。能与UG-1或UG-5组合。常用GG-3K430或GG-6K460。
紫蓝光压制滤板：能通过510nm以上波长的光（绿到红），能与BG-12组合。通常用OG-4K510或OG-1K530。
紫外紫光压制滤板：能通过460nm以上波长的光（蓝到红），可与BG-3组合，常用OG-11K470AK 490，K510。
反光镜
反光镜的反光层一般是镀铝的，因为铝对紫外光和可见光的蓝紫区吸收少，反射达90%以上，而银的反射只有70%；一般使用平面反光镜。
聚光镜
专为荧光显微镜设计制作的聚光器是用石英玻璃或其他透紫外光的玻璃制成。分明视野聚光器的暗视野聚光器两种。还有相差荧光聚光器。
1．明视野聚光器 在一般荧光显微镜上多用明视野聚光器，它具有聚光力强，使用方便，特别适于低、中倍放大的标本观察。
2．暗视野聚光器 暗视野聚光器在荧光显微镜中的应用日益增加。因为激发光不直接进入物镜，因而除散射光外，激发光也不进入目镜，可以使用薄的激发滤板，增强激发光的强度，压制滤板也可以很薄，因紫外光激发时，可用无色滤板（不透过紫外）而仍然产生黑暗的背景。从而增强了荧光图像的亮度和反衬度，提高了图像的质量，观察舒适，可能发现亮视野难以分辨的细微荧光颗粒。
3．相差荧光聚光器 相差聚光器与相差物镜配合使用，可同时进行相差和荧光联合观察，既能看到荧光图像，又能看到相差图像，有助于荧光的定位有效。一般荧光观察很少需要这种聚光器。
物镜
各种物镜均可应用，但一般用消色差的物镜，因其自体荧光极微且透光性能（波长范围）适合于荧光。由于图像在显微镜视野中的荧光亮度与物镜镜口率的平方成正比，而与其放大倍数成反比，所以为了提高荧光图像的亮度，应使用镜口率大的物镜。尤其在高倍放大时其影响明显。因此对荧光不够强的标本，应使用镜口率大的物镜，配合以尽可能低的目镜（4×,5×，6.3×等）。
目镜
在荧光显微镜中多用低倍目镜，如5×和6.3×。过去多用单筒目镜，因为其亮度比双筒目镜高，但目前研究型荧光显微镜多用双筒目镜，观察方便。
落射光装置
新型的落射光装置是从光源来的光射到干涉分光滤镜后，波长短的部分（紫外和紫蓝）由于滤镜上镀膜的性质而反射，当滤镜对向光源呈45。倾斜时，则垂直射向物镜，经物镜射向标本，使标本受到激发，这时物镜直接起聚光器的作用。同时，滤长长的部分（绿、黄、红等），对滤镜是可透的，因此，不向物镜方向反射，滤镜起了激发滤板作用，由于标本的荧光处在可见光长波区，可透过滤镜而到达目镜观察，荧光图像的亮度随着放大倍数增大而提高，在高倍放大时比透射光源强。它除具有透射式光源的功能外，也适用于不透明及半透明标本，如厚片、滤膜、菌落、组织培养标本等的直接观察。近年研制的荧光显微镜多采用落射光装置，称之为落射荧光显微镜
荧光显微镜CCD
荧光显微CCD是与荧光显微镜密切相关的数码摄像产品，一方面它可以将荧光显微镜拍摄的显微摄影产品通过usb接口传输到电脑中，便于图像的采集研究，另一方面，通过荧光显微镜CCD我们可以拍摄到比单纯使用荧光显微镜更好的图片。荧光显微镜CCD可以连接荧光显微镜组成显微成像系统。
使用范围
一般情况下，单独使用荧光显微镜即可以达到我们理想的成像效果，但在某些情况下，比如说当荧光比较微弱的情况下，仅仅通过荧光显微镜并不能达到理想的拍摄效果，或者我们希望可以将拍摄的荧光图片上传的电脑生面预览，修改甚至发表学术论文，这时候没有荧光显微镜CCD是不能达到要求的。
产品特点
荧光显微镜CCD一般具有良好的弱光捕捉能力，能够捕捉到极其微弱的荧光，因此成像良好，此外，很多荧光冷CCD生产上搜对此类CCD作了制冷处理，使得此类CCD的噪音有效降低，信噪比得以有效的提高。由于其方便应用效果，此类CCD相机应用于荧光显微镜。
荧光显微镜的标本制作要求
1、载玻片
载玻片厚度应在0.8～1.2mm之间，太厚的坡片，一方面光吸收多，另一方面不能使激发光在标本上聚集。载玻片必须光洁，厚度均匀，无明显自发荧光。有时需用石英玻璃载玻片。
2、盖玻片
盖玻片厚度在0.17mm左右，光洁。为了加强激发光，也可用于涉盖玻片，这是一种特制的表面镀有若干层对不同波长的光起到不同干涉作用的物质（如氟化镁）的盖玻片，它可以使荧光顺利通过，而反射激发光，这种反射的激发光可激发标本。
3、标本
组织切片或其他标本不能太厚，若太厚激发光大部分消耗在标本下部，而物镜直接观察到的上部不充分激发。另外，细胞重迭或杂质掩盖，影响判断。
4、封裱剂
封裱剂常用甘油，必须无自发荧光，无色透明，荧光的亮度在pH8.5～9.5时较亮，不易很快褪去 。
5、镜油
一般暗视野荧光显微镜和用油镜观察标本时，必须使用镜油，应该使用专门的无荧光镜油也可用上述甘油代替，液体石蜡也可用，只是折光率较低，对图像质量略有影响。
荧光显微镜的使用注意事项和维护与保养
(1)按照荧光显微镜出厂说明书要求进行操作，不要随意改变程序。
(2)应在暗室中进行检查，进人暗室后接通高压稳压器电源，开启3～5rain后再开启激发高压汞灯，当看到高压汞灯完全亮后，停止激发，再开始观察标本。
(3)防止紫外线对眼睛的损害，在调整光源时应戴上防护眼睛。
(4)检查时间每次以1h为宜，超过90min，高压汞灯发光强度逐渐下降，荧光减弱，标本经激发15min后，荧光亦明显减弱。
(5)荧光显微镜的激发装置及高压汞灯寿命有限，标本应集中检查，节省时间。
(6)标本染色后立刻观察，因存放时间太久，荧光会逐渐猝灭。可将染好色的标本用黑纸包好，存放在聚乙烯塑料袋中，4~C保存，可延缓荧光的猝灭时间。
(7)荧光亮度的判断标准一般为四级，即“一”无或可见微弱自发荧光；“+”仅能见明确可见的荧光；“++”可见有明亮的荧光；“+++”可见耀眼的荧光。
荧光显微镜的维护与保养
1．镜头的清洁
镜头上粘的灰尘应用柔软的刷子轻轻刷掉，在有指纹和油污的地方宜用柔软于净的脱脂棉、纱布或擦镜纸蘸上无水乙醇(或甲醇)轻轻擦拭，对物镜表面上的油渍只能用汽油擦拭。
2．涂漆部分、塑料部分的清洁
对涂漆部分、塑料部分用中性去污剂擦拭，避免使用有机溶剂。
